服務(wù)介紹：

      自由基清除率檢測試劑盒(比色法)又稱氮自由基清除能力檢測試劑盒或氮自由基清除率檢測試劑盒，其檢測原理是DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基，含一個(gè)單電子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有強(qiáng)吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個(gè)電子與此單電子配對(duì)，溶液會(huì)褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比，通過吸光度下降的程度來反應(yīng)樣品的氮自由基清除能力，主要用于檢測血清、植物組織、抗氧化類食品、保健品及藥品等樣本。

 實(shí)驗(yàn)流程：

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取新鮮植物樣本，清洗干凈，研缽研碎(粉碎)，干燥箱烘干后過篩，稱取0.05g樣品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存?zhèn)溆?亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿(用肝素或枸櫞酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝) 4℃ 5000rpm離心10min，取上清液待用；血清或尿液樣品可直接測定。

③細(xì)胞樣品：按每5×10⁶個(gè)細(xì)胞加入0.8ml氮自由基提取液，超聲破碎(功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次)，10000rpm離心10min，取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等樣品：按樣品：氮自由基提取液=1：9的比例震蕩混勻，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

⑤    高活性樣品：如果樣品中有效濃度較高，可用提取液進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

   2、配制維生素C溶液：將一支10mg維生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中

   3、配制Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液：如需測線性關(guān)系，建議用氮自由基提取液將10mg/ml維生素C溶液稀釋至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液

    4、 分光光度計(jì)開機(jī)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長517nm(500~530nm亦可)，無水乙醇調(diào)零。

    5、DPPH加樣：按照下表設(shè)置空白管、樣本測定管、樣本對(duì)照管、陽性對(duì)照管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，混勻，室溫避光靜置30min。

6、 OD值測定：將各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度計(jì)檢測各管吸光度值，依次記為A₀、A₁、A₂、A₃。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

全自動(dòng)生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運(yùn)輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)

準(zhǔn)確稱取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。

2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)

全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜（GLU檢測請(qǐng)勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)

可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。

4、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！