服務(wù)介紹：

       植物丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒(TBA比色法)(Plant MDA Assay Kit with TBA)又稱脂質(zhì)氧化(MDA)檢測(cè)試劑盒，是采用一種基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反應(yīng)產(chǎn)生紅色產(chǎn)物的顯色反應(yīng)，隨后通過比色法用于對(duì)植物組織(根、莖、葉、種子等)MDA進(jìn)行檢測(cè)，是專門用于植物脂質(zhì)氧化(lipid peroxidation)水平檢測(cè)的試劑盒，不適用于動(dòng)物組織、細(xì)胞、血液等；丙二醛在較高溫度及酸性環(huán)境中可與TBA發(fā)生反應(yīng)，形成紅色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在532nm處有最大吸收，該復(fù)合物的吸光系數(shù)為155mmol/(L.cm)，并且在600nm波長處有最小吸收，植物組織中糖類物質(zhì)對(duì)MDA-TBA反應(yīng)有干擾，我們總結(jié)出經(jīng)驗(yàn)公式，以消除這一干擾，亦可以通過比標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，進(jìn)行含量檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、 樣本處理：

①制備MDA提取液：取適量的植物根、莖、葉子、種子等，稱量后剪碎，按每0.4g植物樣品加入4ml的比例加入組織勻漿液，充分勻漿(一般取0.4～1g植物樣品即可)。4000g離心10min，取上清液待用

②樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量植物樣品的MDA含量；測(cè)定蛋白濃度非必須步驟，亦可采用經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算。

2、配制TBA工作液：稱取適量TBA，用組織勻漿液配制成濃度為0.68％的TBA工作液，例如取0.068g TBA用10ml組織勻漿液配制，最終濃度即為0.68%的TBA工作液。

3、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：如果進(jìn)行簡易快速檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品直接稀釋至10μM；如果進(jìn)行精確檢測(cè)，取適量標(biāo)準(zhǔn)品用組織勻漿液稀釋至1、2、5、10、20、50μM；

4、樣品測(cè)定:

①分光光度計(jì)測(cè)定：在離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入1ml組織勻漿液作為空白對(duì)照，加入1ml MDA提取液用于測(cè)定，隨后加入1ml TBA工作液。

 ②酶標(biāo)儀測(cè)定：在離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入200μl組織勻漿液作為空白對(duì)照，加入200μlMDA提取液用于測(cè)定，隨后加入200μl TBA工作液?？蓞⒖枷卤碓O(shè)置檢測(cè)反應(yīng)體系，依次加入試劑：

③混勻, 加蓋，95℃水浴煮沸30min，加熱時(shí)務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。

④冷水浴或流水冷卻至室溫，4000g離心10min。

⑤取上清，蒸餾水調(diào)零，用分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定532nm處吸光度，分別記為A_空白、A_{標(biāo)準(zhǔn)}、A_測(cè)定；

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

全自動(dòng)生化儀檢測(cè)后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。

送樣運(yùn)輸要求：

1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)

準(zhǔn)確稱取動(dòng)物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。

2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)

全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜（GLU檢測(cè)請(qǐng)勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)

可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測(cè)。

4、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！